Aktywność syntezy tlenku azotu w niemowlęcym hipertroficznym zwężeniu odźwiernika

HYPERTROPHIC zwężenie odźwiernika występuje klasycznie w ciągu kilku tygodni po urodzeniu. Zazwyczaj dotknięte niemowlęta mają wolne od żółci wymioty, zasadowicę metaboliczną i odwodnienie. Identyfikacja powiększonego odźwiernika (odźwiernik oliwkowy ) przez badanie dotykowe, ultrasonograficzne lub radiologiczne jest patognomonem tego zaburzenia i jest bezpiecznie i skutecznie leczona za pomocą odmy pyloromii.1 Uznaje się, że wada odprężenia odźwiernika jest odpowiedzialna za niedrożność żołądka Tlenek azotu, początkowo zidentyfikowany jako pochodzący od śródbłonka czynnik rozluźniający, 2 okazał się w ciągu ostatnich kilku lat być pluripotencjalną cząsteczką zaangażowaną w wiele funkcji, w tym w neurotransmisję.3 4 5 6 7 U zwierząt tlenek azotu jest ważnym mediatorem złagodzenie przełyku, 8 żołądka, 9, 10 jelita, 11 12 13 i okrężnicy, 14 ale nie wiadomo, czy ma podobne działania u ludzi. Daphafazę NADPH można wykryć za pomocą technik histochemicznych w subpopulacjach neuronów w ośrodkowym układzie nerwowym i splotie mięśniowym, 15, 16, ale jego znaczenie funkcjonalne pozostało niejasne, dopóki nie zostanie uznane za syntazę tlenku azotu.17 Jednocześnie syntaza tlenku azotu w tkankach mózgu i śródbłonka oczyszczono, sklonowano i umiejscowiono za pomocą technik immunohistochemicznych.18, 19 Wreszcie, badania immunohistochemiczne i histochemiczne wykazały, że aktywność syntazy tlenku azotu i dezaforazy NADPH w mózgu i tkankach obwodowych były identyczne.20 Z tych powodów zastosowaliśmy histochemiczną reakcję dezoksyny NADPH w celu zbadania dystrybucji syntazy tlenku azotu w odźwierniku normalnych niemowląt i dzieci oraz niemowląt z przerzutowym przerostem odźwiernika.
Metody
Uzyskaliśmy próbki biopsji mięśniowej pełnej grubości od dziewięciu pacjentów (ośmiu chłopców i jednej dziewczynki w wieku od 2 do 7 tygodni) z infekcyjnym przerostem odźwiernika, u których wykonano pyloromię i 7 pacjentów (pięcioro chłopców i dwie dziewczynki). przedział wiekowy od dnia do 13 lat) bez choroby odźwiernika. Tkankę kontrolną od trzech pacjentów uzyskano podczas autopsji wykonanej w czasie krótszym niż 6 godzin po śmierci oraz podczas rutynowej plastyki pyloplastyki w czasie operacji refluksu żołądkowo-przełykowego w pozostałych czterech. Badanie to zostało zatwierdzone przez naszą instytucjonalną komisję etyczną, a pozwolenie na uzyskanie i wykorzystanie tkanki otrzymano od rodziców każdego pacjenta.
Tkankę utrwalono w świeżym 4 procentowym roztworze paraformaldehydu w buforze fosforanowym przez 48 godzin w 4 ° C, a następnie zamrożono w stopniowanych roztworach sacharozy (10, 20 i 30 procent, po 24 godziny), osadzonych w związku OCT Tissue-Tek ( Miles, Elkhart, Ind.), Szybko zamrożono w 2-metylo-butanie, który schłodzono w suchym lodzie i przechowywano w -80 ° C. Niektóre świeże okazy również natychmiast zamrożono, bez fiksacji. Kriostaty o grubości 20 .m montowano na szkiełkach pokrytych 0,1% poli-L-lizyną (Sigma, St. Louis) i przechowywano w temperaturze -20 ° C do momentu użycia. Skrawki świeżej tkanki utrwalono w 4 procentach paraformaldehydu przez jedną godzinę bezpośrednio przed użyciem.
Barwienie histochemiczne dla daphafazy NADPH przeprowadzono opublikowaną procedurą16 z niewielkimi modyfikacjami
[podobne: układ szkieletowy człowieka, nifuroksazyd hasco, who definicja zdrowia ]